PLC的分類有很多種,可以根據(jù)不同的基數(shù)進行分類。
1、根據(jù)流動相和固定相的極性,高效液相色譜可分為正相色譜和反相色譜。
正相高效液相色譜:柱中的固定相由硅膠、氧化鋁等極性化合物組成。色譜運行時,非極性化合物首先被洗脫出來,因為樣品中的極性化合物對固定相具有更強的親和力,因此它們在色譜柱中的保留時間比非極性化合物長。許多物質(zhì)可以通過正相色譜進行分析,但由于藥 物、食品和其他生物制品大多是非極性的,因此它們在日常生活中的應(yīng)用不如反相色譜廣泛。
反相高效液相色譜:固定相由非極性化合物組成,如十八烷基硅烷、反相 C4 HPLC 色譜柱、C8、C18和其他有機化合物。流動相是極性的。因此,極性高的化合物首先被洗脫,極性低或沒有極性的化合物Z后被洗脫。
HPLC主要分析藥 物、食品、生化分子等物質(zhì),本質(zhì)上都是極性物質(zhì)(水溶性)。因此,反相高效液相色譜得到更廣泛的應(yīng)用。
2、根據(jù)分離原理的不同,高效液相色譜可分為以下六種。
親和層析:主要利用樣品與固定物之間的親和性來實現(xiàn)分離。
離子交換色譜:基于固定相和流動相之間帶電基團的可逆交換來實現(xiàn)分離。離子交換樹脂用于分離含有帶電離子的樣品。對于陰離子,使用陰離子交換樹脂;對于陽離子,使用陽離子交換樹脂。主要用于分離酸性和堿性化合物。
離子對色譜:在反相色譜的流動相或固定相中加入離子對試劑,與樣品中的可電離成分形成“反離子”。常用的離子配對劑是戊烷、己烷、庚烷或辛烷磺酸鹽。
吸附色譜:利用不同吸附的原理,根據(jù)樣品中各組分對固定相的親和力不同進行分離。
尺寸排阻色譜:按分子大小的順序分離樣品中的組分。色譜柱采用軟凝膠如瓊脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等,也可采用烷基葡聚糖、聚苯乙烯等半剛性凝膠。
手性色譜:用于分離樣品中的光學(xué)活性異構(gòu)體。固定相是化學(xué)鍵合硅膠。常用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域。
3、根據(jù)分析目的不同,HPLC可分為分析液相色譜和制備液相色譜。
分析液相色譜法:主要利用檢測器對混合物中的成分進行定性和定量分析。
制備液相色譜:主要是對混合物中的成分進行分離純化。制備柱和進樣體積大于分析柱。
4、眾所周知,混合物的分離是通過流動相流過HPLC柱來完成的,流動相可以是單一溶劑也可以是混合溶劑,因此HPLC可分為等度洗脫和梯度洗脫。脫掉兩種。
等度洗脫:只有一種溶劑,所有操作均在一種溶劑中進行。
梯度洗脫:流動相由兩種或多種溶劑組成,它們的濃度比不斷變化。