RNA組分分析作為許多不同工作流程的重要環(huán)節(jié)，包括但不限于?品檢測(cè)和代謝組學(xué)研究。
這類分析的挑戰(zhàn)之?是它們的極性較強(qiáng)，而且結(jié)構(gòu)相似。
可以使用反相LC，但通常需要離?對(duì)試劑增加保留，而使用離子對(duì)試劑時(shí)需要很長(zhǎng)時(shí)間才能在系統(tǒng)中達(dá)到平衡，使分析工作更加復(fù)雜。
今天小編就給大家介紹一個(gè)分離核酸堿基、核苷、核苷酸及磷酸核糖等13種RNA組分的HILIC方法。
圖1. 核酸堿基、核苷和核苷酸的分析物結(jié)構(gòu)。
LC系統(tǒng)：配備四元溶劑管理器的ACQUITY Premier系統(tǒng)
樣品瓶 ：LCMS TruView zui大回收樣品瓶（貨號(hào)：186005668CV）
流動(dòng)相C：200 mM甲酸銨(pH 3.0)
圖2. 13種RNA組分在四種不同的HILIC固定相上的分離結(jié)果（1.尿嘧啶；2.腺嘌呤；3.腺苷；4.尿苷；5.胞嘧啶；6.?嘌呤；7.胞苷；8.?苷；9.單磷酸腺苷；10.單磷酸尿苷；11.磷酸核糖；12.單磷酸胞苷；13.單磷酸?苷）。
本次實(shí)驗(yàn)中使用的四支色譜柱，除BEH Amide外，其余均為兩性離子或混合模式的色譜柱，由上圖可見，它們?cè)?/span>RNA分析物保留和選擇性方面存在差異。
只有Atlantis Premier BEH Z-HILIC色譜柱能使所有化合物實(shí)現(xiàn)分離，而在其他色譜柱上至少均出現(xiàn)?組共洗脫化合物。
雖然Xevo TQD也可以檢出這些化合物的峰，但更好的分離度便于對(duì)這些物質(zhì)進(jìn)行更好地積分和表征。
Atlantis Premier BEH Z-HILIC色譜柱采用的MaxPeak高性能表面(HPS)硬件可減輕磷酸化合物與色譜柱金屬表面間的次級(jí)相互作用。
在某些條件下，這些金屬和分析物的相互作用會(huì)導(dǎo)致峰形差異，甚?可能導(dǎo)致樣品損失。
注：本文分享自【沃特世技術(shù)服務(wù)】公眾號(hào)。
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