PolyLC PolyPROPYLA色譜柱

產(chǎn)品描述

PolyPROPYLA色譜柱是硅膠基材料，可通過疏水相互作用（HIC），HIC分離蛋白的方法是基于蛋白質(zhì)的疏水特點(diǎn)，比如RPC。但是，HIC使用完全含水的緩沖器,保留住了蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)和生物活性。這種分離性通常優(yōu)于RPC方法分離蛋白質(zhì)和多肽，能夠極大的保留蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。通常情況下,樣品使用硫酸鹽或磷酸鹽等鹽濃度降低梯度洗脫，通過增加蛋白質(zhì)表面疏水性將其洗脫。表面活性劑(例如丙磺酸；辛基糖苷)如果必要的話可以被添加到流動(dòng)相的。PolyPROPYLA的相對(duì)疏水值為100。HIC比其他方法有更大的敏感性，尤其是涉及到非極性基團(tuán)。HIC適用于:

• 多維蛋白純化（建議順序:離子交換-鹽梯度洗滌分離-HIC)。
• 多肽的純化（比如毒液、糖肽類）
• 表面抗體
• 質(zhì)量控制分析蛋白質(zhì)的單一殘基的極性或者突變體的修飾位點(diǎn)。

大于20KDa的蛋白質(zhì)建議使用1000 -或1500-A的孔。其能力可以與離子交換相媲美。除非該蛋白是公認(rèn)的顯著疏水性，建議使用PolyPROPYL A。

HIC 的問題：

1. 脫鹽：不幸的是，HIC 中使用的鹽不可凍干。它們可以使用色譜法（空間排阻、反相等）或透析從樣品中去除。
2. 基線：HIC 中使用的顯著鹽濃度梯度導(dǎo)致流動(dòng)相的折射率發(fā)生巨大變化。這可能會(huì)導(dǎo)致基線出現(xiàn)人為峰。例如，當(dāng)在 220 nm 處監(jiān)測(cè)流出物時(shí)，使用硫酸銨梯度會(huì)產(chǎn)生一個(gè)上升的基線，并具有較寬的*大值。根據(jù)使用的鹽和波長(zhǎng)，可能會(huì)觀察到基線上升或下降。該問題在 254nm 和 280nm 處不太嚴(yán)重。基線的變化對(duì)可以在線可靠檢測(cè)的蛋白質(zhì)量施加了一個(gè)下限。如果蛋白質(zhì)或肽含有色氨酸，則通過監(jiān)測(cè)熒光而不是吸光度可以完全消除該問題。
3. 變性：HIC促進(jìn)三級(jí)結(jié)構(gòu)的保留，大部分蛋白質(zhì)被回收，80-100%的生物活性保留。但是，四元結(jié)構(gòu)可能會(huì)受到影響；使用的高鹽濃度會(huì)導(dǎo)致一些含有亞基的蛋白質(zhì)分解。這種影響通常與列無關(guān)，并且必須在每個(gè)單獨(dú)的情況下進(jìn)行評(píng)估。
4. 聚合：一般來說，這不是一個(gè)大問題。傾向于在溶液中聚集的混合物有時(shí)會(huì)從 HIC 柱中以離散峰形式洗脫。聚集通常涉及疏水相互作用，但似乎色譜柱填料的疏水表面超過了單個(gè)蛋白質(zhì)單體相互結(jié)合的趨勢(shì)。

規(guī)格

具有 2μm 顆粒的色譜柱 （孔徑選項(xiàng)：-10、-15。其他可用：ASK）