|| 本文分享自Restek公司公眾號(hào) ||
有些萌新們拿到液相柱不定時(shí)的會(huì)遇到些壓力問題，我們在線教學(xué)如何處理此類問題！
這是收藏級(jí)干貨 || 如何解決背壓增加&堵塞或污染問題？
請注意系統(tǒng)的運(yùn)行壓力限，以及是否有程序設(shè)定的壓力限。請查閱儀器操作手冊以獲取此信息。程序設(shè)定時(shí)，請勿超過系統(tǒng)運(yùn)行壓力限。常規(guī)HPLC系統(tǒng)（非UHPLC）的工作壓力極限通常在5800 – 7000 psi（400 – 500 bar）的范圍內(nèi)，這也適用于HPLC色譜柱和全多孔的填料。物理壓力限通?；陂y門，泵和其他組件的額定值來確定，超過此壓力，會(huì)發(fā)生泄漏。還請大家記住，比如：甲醇和水之類的溶劑會(huì)產(chǎn)生更高的背壓。通常，對(duì)于3μm或5μm粒徑的全多孔色譜柱，建議不要超過6000 psi。另一方面，色譜分辨率更多取決于實(shí)際要求，具體取決于可以為您提供可接受的科學(xué)數(shù)據(jù)結(jié)果。下表可用于確定*佳流速，以使色譜柱獲得*佳分離度。它還提供了乙腈或甲醇可能產(chǎn)生的色譜柱壓力的預(yù)估值。 請記?。好總€(gè)色譜柱的實(shí)際壓力會(huì)有所不同，通常會(huì)隨使用時(shí)間而略有增加。并且，壓力讀數(shù)是總壓力的反映，其中包括系統(tǒng)本身的任何固有背壓。3. 在沒有HPLC柱的情況下監(jiān)控系統(tǒng)壓力在安裝色譜柱之前，用兩通連接器換下舊色譜柱，并讓系統(tǒng)運(yùn)行一次。 在此配置中記錄系統(tǒng)壓力并將其保留在文件中以供參考。 不時(shí)檢查一下，如果有增加，則表明流路中有堵塞。通過檢測這種變化，您可以防止超壓的錯(cuò)誤和潛在危機(jī)。一旦您安裝了色譜柱，運(yùn)行方法穩(wěn)定，記錄對(duì)應(yīng)流動(dòng)相和流速條件的相應(yīng)壓力。 這將被用作基線，作為您的色譜柱壽命的參照。 劃重點(diǎn)：以下內(nèi)容僅適用于全多孔粒子（FPP），而不適用于Raptor色譜柱（SPP）。
注：柱內(nèi)徑單位：㎜，柱長度單位：㎜，粒徑單位：μm，*佳流速：mL/min，乙腈的預(yù)估壓力：（psi）@30°C，甲醇的預(yù)估壓力：（psi）@30°C
如果您一根色譜柱使用了一段時(shí)間，與新色譜柱壓力相比，發(fā)現(xiàn)壓力增加，您需要查看此壓力來自何處，也許是來自色譜柱，也許不是。收藏級(jí)干貨 || 如何解決背壓增加&堵塞或污染問題？
那么可以通過以下步驟確定（敲黑板，劃重點(diǎn)！）：
A. 將柱出口連接斷開，將出口管直接放入廢物瓶或燒杯中。
打開泵，然后觀察并記錄壓力。
還要注意從色譜柱中流出的任何微?；蛴猩镔|(zhì)。
連續(xù)泵20分鐘或直到色譜柱不再流出可見物質(zhì)。
再次觀察壓力，看看它是否已更改，然后記錄數(shù)值。
如果在20分鐘后仍有可見物質(zhì)流出色譜柱，請拆下并更換柱子。
B. 如果在步驟A中斷開色譜柱后，壓力立即恢復(fù)到該色譜柱的正常范圍（上述步驟4記錄的），且沒有可見殘留物流出，則表明色譜柱后的流路中有堵塞，可能是在通向檢測器的管道或閥門的某處，也可能是在檢測器流動(dòng)池中。
按照儀器制造商的建議，根據(jù)需要更換管道和/或清潔流動(dòng)池。
檢查所有配件和閥門的裝配是否正確，并確保管道沒有壓扁。
檢查緩沖鹽是否有積聚，并根據(jù)需要清潔或更換部件。
C. 如果在進(jìn)行步驟a之后，沒有觀察到殘留物，壓力沒有顯著降低，取下色譜柱并換成兩通連接器。
泵穩(wěn)定后，將壓力與上述的步驟3中記錄為基線的壓力進(jìn)行比較。
如果系統(tǒng)壓力接近之前的步驟3中的數(shù)值，那么您已經(jīng)確認(rèn)了壓力的增加來自于色譜柱，*可能是顆粒堵塞了柱入口篩板。
對(duì)于3μm和5μm粒徑的全多孔粒子柱，嘗試使用流動(dòng)相反沖色譜柱30分鐘，出口連入廢物瓶。 （請注意，對(duì)于1.9μm UHPLC色譜柱或Raptor色譜柱，不建議反沖）。
如果壓力仍然高，請使用一系列具有不同極性的溶劑重復(fù)反沖。
如果您使用的流動(dòng)相含有緩沖溶劑，用含有大量水（對(duì)典型的C18相，用60-90％），不含緩沖鹽、酸或改性劑的溶液。請小心使用氯化溶劑，因?yàn)?/span>PEEK材料可能略有膨脹。
如果反沖不能降低背壓，那么*可能是顆?；蚧钚曰衔锱c柱子發(fā)生了不可逆地結(jié)合，則需要更換。
同樣，如果按這些步驟并正向沖洗1.9μm UHPLC色譜柱或Raptor色譜柱，沒有解決問題，那么您的色譜柱可能壽命到了，需要更換。
D. 如果在不接色譜柱的情況下檢查系統(tǒng)壓力，壓力高于之前不接色譜柱的壓力（參見上述步驟3），則系統(tǒng)中存在堵塞。 請查閱您的HPLC操作手冊或聯(lián)系HPLC儀器廠家。
為了避免將來發(fā)生這樣的問題，我們強(qiáng)烈建議您使用保護(hù)柱，以保護(hù)您的液相色譜柱，避免篩板堵塞和色譜柱污染。
那么，請看下圖：
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