高效液相色譜柱的管理
欄目管理
制定并嚴(yán)格執(zhí)行色譜柱管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。每一個(gè)新購(gòu)買的色譜柱都必須進(jìn)行注冊(cè)登記，內(nèi)容包括生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、型號(hào)、規(guī)格、購(gòu)買時(shí)間、開機(jī)時(shí)間、單價(jià)、色譜柱保護(hù)液等。色譜柱分類存放，柱盒，盒子上貼有標(biāo)簽，注明類別，如硅膠柱、化學(xué)鍵合硅膠柱、氰基或氨基柱、離子交換樹脂柱、凝膠柱。色譜柱說明裝在一個(gè)緊湊的袋子中，并附在注冊(cè)簿上。 每次激活色譜柱時(shí)，都會(huì)在色譜柱上貼一個(gè)標(biāo)簽以指示激活日期。色譜柱多可以使用色譜柱收納箱，方便收納。
每列每?jī)蓚€(gè)月維護(hù)一次，特別是對(duì)于使用頻率較低的列。 由于存放時(shí)間長(zhǎng)，很容易使柱子變干。 每次做保養(yǎng)記錄。
對(duì)于確實(shí)出現(xiàn)故障的色譜柱，做好退役記錄，不要隨意丟棄，專門存放。 如果需要填充當(dāng)前使用的色譜柱的填料，可以使用色譜柱的儲(chǔ)存填料。 在從事生產(chǎn)的單位質(zhì)檢部門，對(duì)于使用時(shí)間長(zhǎng)的柱子，可以用來檢測(cè)產(chǎn)品的中間體，降低了效率。
色譜柱維護(hù)
色譜柱使用一段時(shí)間后，經(jīng)常會(huì)遇到色譜柱被污染的情況，色譜柱的效率會(huì)在一定程度上降低。采用適當(dāng)?shù)姆椒ūＷo(hù)色譜柱，可以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
樣品和流動(dòng)相處理
溶解的樣品在進(jìn)樣前用濾膜過濾以去除不溶物。 如有必要，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。 流動(dòng)相中的雜質(zhì)會(huì)影響效率，所以盡量使用色譜純?nèi)軇?，至少是分析純，使用前用微孔膜過濾流動(dòng)相。 在流動(dòng)相的輸液管前安裝過濾器。 過濾器定期用甲醇超聲波清洗，如果效果不好，可用10%的稀硝酸浸泡清洗。 對(duì)于嚴(yán)重堵塞的過濾器，可以在火焰上燃燒后進(jìn)行清潔。
保護(hù)柱（預(yù)柱）的使用
對(duì)于更貴的色譜柱，可以在柱前加一根保護(hù)柱，防止樣品中的雜質(zhì)污染分析柱。 對(duì)于制備柱，保護(hù)柱的使用尤為重要，因?yàn)樗倪M(jìn)樣量很大。
常規(guī)沖洗
硅膠、氧化鋁、極性鍵合色譜柱每次使用后，用二氯甲烷或正己烷等溶劑低流速長(zhǎng)時(shí)間沖洗； 對(duì)于鍵合硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱，先用蒸餾水沖洗，再用甲醇沖洗，再用甲醇和蒸餾水按一定比例混合的溶液沖洗過夜。
對(duì)于使用一段時(shí)間后柱效下降的色譜柱，可采用以下方法進(jìn)行再生。
硅膠、氧化鋁和極性鍵合相色譜柱按以下順序洗滌：堿戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙酯←→丙酮←→乙醇←→水。 對(duì)于鍵合相硅膠，先用蒸餾水再用甲醇洗柱子。 洗滌過程中可加入少量二甲基甲酰胺。
離子交換樹脂柱
大多數(shù)樹脂可以通過高濃度（1-2molL）的NaCl溶液再生。 少數(shù)與樹脂結(jié)合緊密的物質(zhì)如油脂，可用低濃度堿性溶液（如0.1molL NaOH溶液）洗滌，酸性有機(jī)物吸附在固定相上。 用低pH緩沖液沖洗，堿性有機(jī)物用高pH緩沖液沖洗，然后用蒸餾水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸餾水。
凝膠色譜柱
根據(jù)分離物質(zhì)的分子量，凝膠柱分離物質(zhì)。 一般來說，用非離子洗滌劑（0.2%-1% NP-40或Lubrol）或稀釋的氫氧化鈉清洗以去除大部分結(jié)合物質(zhì)。通常用稀氫氧化鈉或非離子洗滌劑（0.2%-1% NP-40 或 Lubrol）洗滌以去除大部分結(jié)合物質(zhì)。
若仍有部分污染物無(wú)法去除，可用24%或30%乙腈沖洗過夜以去除疏水蛋白，30%-50%醋酸可去除親水性蛋白質(zhì)，用蛋白水解酶處理可分解凝膠中殘留的微量胃蛋白酶，并然后用蒸餾水←→甲醇←→蒸餾水沖洗。
污染柱的處理
由于強(qiáng)保留物質(zhì)的污染，流動(dòng)相或樣品中的不溶物沉積在柱頭上。 可采用以下方法洗滌： 除脂可用C4H8O、乙腈或甲醇洗滌； 去除蛋白質(zhì)可用乙腈、丙醇和1%三***洗脫； 一些高度疏水的化合物可以用乙腈或甲醇洗脫，同時(shí)重復(fù)注入 100-200ml C4H8O。
柱頭處理
對(duì)于柱頭嚴(yán)重堵塞污染、溶劑失效的色譜柱，只能打開柱子拆下柱頂填料重新安裝：先拆下不銹鋼燒結(jié)過濾器，檢查柱床，常見凹痕或被污染的有色填料，去除不規(guī)則床層和有色填料，使柱床呈白色且完全水平，然后用甲醇作為糊狀填料勻漿，將糊狀填料勻漿滴在柱上，靠重力從勻漿中排出甲醇溶液. 重復(fù)上述步驟，直到達(dá)到填充水平。
柱存儲(chǔ)
首先，色譜柱在存放之前必須進(jìn)行清潔。如果儲(chǔ)存在水性溶劑或水中，色譜柱可能會(huì)導(dǎo)致微生物的生長(zhǎng)。
極性色譜柱可用適當(dāng)?shù)娜軇┤缍燃淄闆_洗；
用甲醇沖洗鍵合相色譜柱； 陰離子交換層析柱用0.002%氯己定（氯己定）緩沖液沖洗，陽(yáng)離子交換層析柱用0.005%硫柳汞緩沖液沖洗； 凝膠色譜柱用緩沖液中的 0.02% 氮化鈉或 20% 乙醇沖洗。 然后密封柱子兩端，防止溶劑蒸發(fā)干燥柱子而引起柱子結(jié)構(gòu)的幾何變化。
