高效液相色譜柱特點(diǎn)介紹
液相色譜柱是按照嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)和測(cè)試的。如果能按照以下信息使用和維護(hù)色譜柱，不僅可以獲得更好的測(cè)試結(jié)果，而且可以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
有必要了解更多關(guān)于所用樣品的信息，例如結(jié)構(gòu)、分子量、酸堿度、極性等。當(dāng)您要選擇色譜柱時(shí)。
1、如果樣品是極性弱酸性的，我們可以選擇C18 HPLC色譜柱在100%酸性水溶液條件下檢測(cè)，即選擇保留好的極性化合物并能承受100%純水的色譜柱。
2、可選擇CN、NH2或硅膠柱、HILIC（親水色譜），如果樣品極性過強(qiáng)或酸性過強(qiáng)，也可以使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換柱。（問題是離子對(duì)試劑平衡需要很長(zhǎng)時(shí)間，需要更精 確的流動(dòng)相pH值。否則重復(fù)實(shí)驗(yàn)會(huì)很困難。更糟糕的是，很難洗掉離子對(duì)試劑。一般情況下，對(duì)于使用離子對(duì)的色譜柱，不適合用于其他實(shí)驗(yàn)）。
3、如果堿性化合物極性太強(qiáng)，或者堿性太強(qiáng)，可以選擇寬pH C18柱在高pH值下檢測(cè)（優(yōu)點(diǎn)是方法開發(fā)簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是目前實(shí)施該技術(shù)的色譜柱品牌較少，價(jià)格較高）或使用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，也是一種非常經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法）。選擇強(qiáng)離子交換柱，不適合分析其他樣品。相對(duì)pH要求更精 確，否則難以重復(fù)實(shí)驗(yàn)。也可使用 C18+ 強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。
4、如果樣品呈堿性，選擇高純硅膠柱（高純硅膠不含金屬雜質(zhì)，硅膠端基被封閉）或一些改良的C18柱。它們會(huì)減少堿性化合物的拖尾，一般選擇在中性或偏堿性條件下進(jìn)行，因?yàn)檫@樣可以增加堿性樣品的保留。
反相高效液相色譜柱的主要功能和物理性質(zhì)
反相高效液相色譜柱以其分離效率高、選擇性好、檢測(cè)靈敏度高、操作自動(dòng)化、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)成為廣大分析人員的首 選分析方法。流動(dòng)相在液相分離中起著重要作用，是液相色譜柱系統(tǒng)的大腦。能否選擇合適的流動(dòng)相會(huì)影響整個(gè)分析的質(zhì)量。掌握流動(dòng)相選擇的理論知識(shí)對(duì)于分析人員，尤其是藥 物分析人員來說是非常有必要的。
選擇合適的流動(dòng)相進(jìn)行分析是一項(xiàng)艱巨且非常艱巨的任務(wù)。盡管沒有關(guān)于流動(dòng)相選擇的簡(jiǎn)單技巧、捷徑或秘密，但有一些理論可以簡(jiǎn)化這個(gè)過程。反相HPLC的流動(dòng)相一般由水相和有機(jī)相組成。
反相 HPLC 色譜柱的物理特性
硅膠純度：硅膠純度對(duì)于強(qiáng)極性化合物的分離更為重要。殘留的金屬離子濃度和二氧化硅雜質(zhì)會(huì)影響化合物的峰形。硅膠表面金屬含量高會(huì)影響堿性化合物的峰形，容易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。
A型硅膠由金屬硅酸鹽制成，硅膠金屬含量高，純度低，可用于中性化合物和非離子化合物的分離。
B型硅膠采用無金屬工藝制備，純度高，酸性弱，僅含少量金屬?？捎糜诜蛛x離子化合物、可電離化合物，尤其是堿性化合物。
目前的色譜柱填料主要是B型硅膠，但不同品牌、型號(hào)的色譜柱硅膠表面金屬含量仍略有差異。如果色譜峰形較差，則需要注意不同品牌色譜柱的硅膠純度。
色譜柱尺寸：增加色譜柱的長(zhǎng)度可以在一定程度上提高柱效，但也會(huì)增加壓力，導(dǎo)致峰展寬；較寬的柱徑會(huì)增加上樣量，但也會(huì)增加橫向擴(kuò)散，這也會(huì)導(dǎo)致峰展寬。窄柱徑可節(jié)省溶劑，減少橫向擴(kuò)散，但壓力較高，系統(tǒng)要求較高。
