當(dāng)樣品的進(jìn)樣量在**范圍內(nèi)時(shí)，改變進(jìn)樣量會(huì)相應(yīng)地影響峰高和峰面積。但保留時(shí)間、峰寬和分辨率的影響很小。當(dāng)注射量或質(zhì)量過大時(shí)，會(huì)引起過載現(xiàn)象。隨著峰寬的增加，峰形變差和分辨率降低是不可避免的
對(duì)于長度為50-250mm，內(nèi)徑為4-5mm的色譜柱，單次進(jìn)樣的進(jìn)樣質(zhì)量應(yīng)小于50μg，進(jìn)樣體積應(yīng)小于25μL。過載分為體積過載和質(zhì)量過載兩種，下面將介紹兩種過載對(duì)分離的影響。
（1） 體積過載：下圖顯示了分別含有10、40、60、80和100μL的1mg/mL連翹苷的色譜圖?？梢钥闯?，10μL的峰型*好，40μL的峰面積*大，隨著進(jìn)樣量的增加，峰型越明顯。
（2） 質(zhì)量過載：下圖是氨基酸及其衍生物的測定，顯示了正常和超大質(zhì)量條件下的峰形狀。
過載會(huì)影響色譜峰的形狀，只有當(dāng)樣品的體積和質(zhì)量在合適的范圍內(nèi)時(shí)，才能得到良好的峰形狀?，F(xiàn)在，我們將繼續(xù)討論哪些因素會(huì)導(dǎo)致領(lǐng) 先區(qū)域或落后區(qū)域。
領(lǐng) 先區(qū)域：（拖尾系數(shù)<0.95）
1.溶劑效應(yīng)的影響
（1） 用流動(dòng)相溶解樣品：（姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品）
（2） 首先用強(qiáng)溶劑溶解樣品，然后用流動(dòng)相稀釋：（石杉?jí)A標(biāo)準(zhǔn)）
2.緩沖作用不當(dāng)：（注射苦參堿）
3.儀表系統(tǒng)不正確
在傳統(tǒng)液相色譜儀上使用Ultisil®XB-C18柱（4.6×50mm，1.8μm）時(shí)，其峰形將受到系統(tǒng)大死體積的影響。
拖尾面積：（拖尾因子<0.95）
1.降低pH值并抑制二氧化硅羥基的電離。
2.增加緩沖鹽，提高緩沖效果
3.由于每種緩沖鹽的緩沖容量不同，可以通過改變緩沖鹽來調(diào)整
4.屏蔽二氧化硅的影響（如添加三乙胺）
在我們的定性和定量檢測分析中，峰的形狀對(duì)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大的影響，因此確保良好的峰形狀是我們實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵，而異常峰形狀的檢測和解決當(dāng)然是我們實(shí)驗(yàn)分析的一項(xiàng)重要技能。
